Seroprevalence of Brucella ovis-epididymitis, smooth-Brucella, leptospirosis, toxoplasmosis, and Maedi-Visna in sheep slaughtered in Minas Gerais State, Brazil / Soroprevalência de Brucella ovis, Brucella lisa, leptospirose, toxoplasmose e Maedi-Visna em ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil

The present study aimed to estimate the prevalence of antibodies against Brucella ovis-epididymitis, smooth-Brucella, leptospirosis, toxoplasmosis and Maedi-visna in sheep slaughtered in Minas Gerais, Brazil and to study their simultaneous occurrence, including caseous lymphadenitis, at sheep and flock levels. The study was conducted at a sheep slaughterhouse with Federal Inspection Service. Sera from 594 animals from 21 flocks were collected, in 2007. The agar gel immunodiffusion (AGID) was employed to detect anti-B. ovis and anti-Maedi Visna antibodies, whereas Rose Bengal (RB) and the 2-mercaptoethanol test (2ME) were used to test anti-smooth Brucella antibodies. For the detection of anti-Leptospiraantibodies, sera were examined by microscopic agglutination test (MAT), while for the detection of IgG antibodies to Toxoplasma gondii ELISA was used. Prevalence of antibodies against smooth Brucella, B. ovis-epididimitis, Leptospiraspp., toxoplasmosis and Maedi-Visna found in sheep from Minas Gerais was 0.00%, 24.04%, 25.96%, 10.46% and 3.08%, respectively; whereas the seroprevalence in flocks was 0.00%, 80.95%, 90.48%, 71.43% and 23.81%, respectively. Moreover, when data on antibodies anti-Corynebacterium pseudotuberculosis, previously obtained, were included, about 60% of the flocks showed animals that were exposed to four or more of the studied agents. However, only 25.47% of the sheep exhibited simultaneously antibodies against more than one pathogen. Thus, data from the present study on sheep slaughtered in Minas Gerais, Brazil, showed no antibodies to smooth-Brucella and a low frequency of antibodies anti-Maedi Visna lentivirus, and a high and widespread seroprevalence of B. ovis, Leptospira spp., and T. gondii among animals and flocks.(AU)

O presente estudo teve como objetivo estimar a prevalência de anticorpos contra Brucella ovis (epididimite ovina), Brucellalisa, leptospirose, toxoplasmose e Maedi-visna em ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil, e estudar sua ocorrência simultânea, incluindo linfadenite caseosa, nos ovinos e nos rebanhos. O estudo foi realizado em um abatedouro de ovinos com Serviço de Inspeção Federal. Soros de 594 animais de 21 rebanhos foram coletados, em 2007. A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi empregada para detectar anticorpos anti-B. ovis e anticorpos anti-Maedi Visna, enquanto o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT) e o teste de 2-mercaptoetanol (2ME) foram utilizados para testar anticorpos anti-Brucella lisa. Para a detecção de anticorpos anti-Leptospira, os soros foram examinados pelo teste de aglutinação microscópica (MAT), enquanto que para a detecção de anticorpos IgG para Toxoplasma gondii, foi usado o ELISA. A prevalência de anticorpos anti-Brucella lisa, B. ovis, Leptospira spp., toxoplasmose e Maedi-Visna encontrados em ovinos de Minas Gerais foi de 0,00%, 24,04%, 25,96%, 10,46% e 3,08%, respectivamente; enquanto a soroprevalência em rebanhos foi de 0,00%, 80,95%, 90,48%, 71,43% e 23,81%, respectivamente. Além disso, quando dados de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis, previamente obtidos, foram incluídos, cerca de 60% dos rebanhos apresentaram animais expostos a quatro ou mais dos agentes estudados. No entanto, apenas 25,47% dos ovinos exibiram simultaneamente anticorpos contra mais de um patógeno. Assim, os dados do presente estudo sobre ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil, mostram que ausência de anticorpos anti-Brucella lisa e baixa frequência de anticorpos anti-Maedi Visna, e uma soroprevalência alta e generalizada de B. ovis, Leptospira spp. e T. gondii entre animais e rebanhos.(AU)

Ação do extrato do resíduo de Caryocar brasiliense frente a formação de biofilme dos principais microrganismos veiculados por produtos de origem animal / Action of the Caryocar brasiliense waste extract against the biofilm formation of the main microorganisms carried by products of animal origin

Objetivou-se com o presente estudo avaliar a inibição da formação de biofilme pelo extrato do resíduo do pequi frente a microrganismos patogênicos e deteriorantes de alimentos. A casca do pequi foi obtida de frutas coletadas na cidade de Montes Claros/MG, foi seca em estufa de ventilação forçada, moída e peneirada em 250 Mesh. Seu extrato foi obtido em micro-ondas analítico. Foram utilizadas cinco cepas padrão e cinco isolados de produtos de origem animal, que foram reativadas e confirmado a sua pureza em ágar específico. Para avaliar a formação do biofilme foram utilizadas microplacas esterilizadas, sendo adicionados 90µL de BHI com 1% de glicose, 10µL da suspensão de cada bactéria e o extrato em diferentes concentrações. Concluiu-se que o extrato da casca do pequi inibe a formação de biofilme por bactérias patogênicas e deteriorantes.

Comparative genomics of pathogenic Leptospira interrogans serovar Canicola isolated from swine and human in Brazil

Leptospira interrogans serovar Canicola is one of the most important pathogenic serovars for the maintenance of urban leptospirosis. Even though it is considered highly adapted to dogs, serovar Canicola infection has already been described in other animals and even a few human cases. Here, we present the genomic characterisation of two Brazilian L. interrogans serovar Canicola strains isolated from slaughtered sows (L0-3 and L0-4) and their comparison with human strain Fiocruz LV133. It was observed that the porcine serovar Canicola strains present the genetic machinery to cause human infection and, therefore, represent a higher risk to public health. Both human and porcine serovar Canicola isolates also presented sequences with high identity to the Chinese serovar Canicola published plasmids pGui1 and pGui2. The plasmids identification in the Brazilian and Chinese serovar Canicola strains suggest that extra-chromosomal elements are one more feature of this serovar that was previously unnoticed.

Genomic characterisation of Leptospira inadai serogroup Lyme isolated from captured rat in Brazil and comparative analysis with human reference strain

Leptospira inadai is classified as a species of the Leptospira intermediate group that has been poorly studied due to its apparent insignificance to human and animal health. Nevertheless, over the last two decades the species has been described in human cases in India and in carrier animals in Ecuador. Here, we present the first identification and genomic characterisation of L. inadai serogroup Lyme isolated from captured rodent in Brazil. Even though the M34/99 strain was not pathogenic for hamsters, it was able to establish renal colonisation. The M34/99 strain presented high similarity with L. inadai serogroup Lyme human reference indicating that animal strain could also infect humans, although it does not represent high risk of severe disease. An extrachromosomal sequence was also identified in M34/99 strain and presented high identity with previously described L. inadai phage LinZ_10, suggesting that phage-like extrachromosomal sequence may be another feature of this understudied species.

False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis / Reações falso-negativas ao teste cervical comparativo para tuberculose bovina

According to the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), the routine tests for the diagnosis of bovine tuberculosis in the country are the simple intradermal tuberculin test (SITT) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the caudal fold test and the comparative intradermal tuberculin test (CITT). The latter is also used as a confirmatory test. A group of 53 animals from three dairy herds in a focal area for bovine tuberculosis, that were submitted to depopulation in the state of Rio Grande do Sul, were submitted to the CITT. Tissues were cultured and the resulting colonies were confirmed by PCR and DNA sequencing. Among the 53 animals analyzed using the CITT, 32 (60.4%) were negative, 14 (26.4%) were positive and seven (13.2%) results were inconclusive. The CITT detected 11 of the 39 animals with culture-confirmed M. bovis infection as positive. Among the total of 14 uninfected animals based on cultures, the CBT detected eight as negative. Thus, the CITT demonstrated sensitivity of 28.2% and specificity of 57.1% for the population sampled. A total of 24/32 (75.0%) of the animals with negative CITT results were culture positive (confirmed by PCR) and were considered false negatives based on the CITT. The maintenance of these false-negative animals in herds has serious implications for the control of the disease, since they can be a source of infection. The addition of complementary tests could help identify such animals and increase the odds of diagnostic success.(AU)

No Brasil, segundo o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), os testes de rotina para o diagnóstico de tuberculose bovina são o teste cervical simples (TCC), o teste da prega caudal (TPC) e o teste cervical comparativo (TCC), sendo que o último também é utilizado como teste confirmatório. Um grupo de 53 animais oriundos de três rebanhos leiteiros de área de foco para tuberculose bovina que foram submetidos a vazio sanitário no Rio Grande do Sul foi submetido ao TCC. Os tecidos destes animais foram cultivados e as colônias resultantes confirmadas por PCR e sequenciamento de DNA. Dos 53 animais analisados no TCC, 32 (60,4%) foram negativos, 14 (26,4%) positivos e sete (13,2%) inconclusivos, com base no PNCEBT. O TCC detectou como positivos 11 dos 39 animais com infecção por M. bovis confirmada por cultivo. Do total de 14 animais não infectados, baseado na cultura, o TCC detectou oito como negativos. Assim, o TCC apresentou, para a população amostrada, sensibilidade de 28,2% e especificidade de 57,1%. Um total de 24/32 (75,0%) dos animais negativos ao TCC foi positivo no cultivo (confirmado por PCR), sendo considerados falso-negativos ao TCC. A manutenção destes animais falso-negativos nos rebanhos tem sérias implicações para o controle da enfermidade, já que os mesmos podem ser fonte de infecção. A adição de testes complementares poderia auxiliar na identificação destes animais, aumentando a cobertura diagnóstica.(AU)

Repetition of estrus is the most frequent reproductive problem after breeding in dairy cattle from Rio de Janeiro, Brazil / Repetição de estro é o problema reprodutiva mais comum em vacas leiteiras do Estado do Rio de Janeiro, Brasil

ABSTRACT: Reproductive efficiency is one of the key elements for any milk production system to be successful. In this regard, reproductive management must be planned properly and the identification of the main reproductive disorders that affect the herd is primordial for decision-making. The aim of the present study was to identify the main reproductive problems that affect dairy herds on Rio de Janeiro (RJ), Brazil. Data regarding breed, age, reproductive disorder occurrence, and breeding system were individually collected from dairy cows raised at 25 farms located at RJ. The occurrence of reproductive disorders was reported in 37% of the studied animals. Estrous repetition (76.2%) and abortion (15.6%) were the most frequent reproductive problems reported. Estrous repetition was more common in older animals (>6 years old). However, an association between abortion and age of animal was not observed, nor an association between breeding system and occurrence of abortion. The present results demonstrated that estrous repetition is the main obstacle to the reproductive efficiency in dairy herds at RJ, and that the replace of older cows by heifers is an important point within reproductive management of a dairy herd.

RESUMO: A eficiência reprodutiva é um dos principais elementos para qualquer sistema de produção de leite ser bem-sucedida. Neste contexto, o manejo reprodutivo deve ser planejado adequadamente e a identificação das principais desordens reprodutivas que afetam o rebanho é essencial para a tomada de decisão. O objetivo do presente estudo foi identificar os principais problemas reprodutivos que acometem rebanhos leiteiros no Rio de Janeiro (RJ), Brasil. Dados relacionados com a raça, idade, ocorrência de problema reprodutivo e o sistema de acasalamento foram individualmente coletados de vacas leiteiras criadas em 25 fazendas localizadas no RJ. A ocorrência de desordens reprodutivas foi relatada em 37% dos animais estudados. A repetição de estro (76,2%) e abortamento (15,6%) foram os problemas reprodutivos mais frequentemente relatados. A repetição de estro foi mais comum em animais mais velhos (>6 anos). Contudo, uma associação entre abortamento e idade do animal não foi observada, nem uma associação entre o sistema de acasalamento e a ocorrência abortamento. Os presentes resultados demonstraram que a repetição de estro é o principal obstáculo para a eficiência reprodutiva nos rebanhos leiteiros do RJ, e que a substituição de animais mais velhos por novilhas é um importante ponto dentro do manejo reprodutivo de um rebanho leiteiro.

Molecular demonstration of intermittent shedding of Leptospira in cattle and sheep and its implications on control / Demonstração molecular da intermitência eliminando Leptospira em vacas e ovelhas e suas implicações no controle

ABSTRACT: For a long time, it has been stated that urine leptospiral shedding is intermittent, which was observed primarily by culturing. However, culturing presents serious limitations, mainly low sensitivity, and failure on detection of leptospires cannot be neglected. PCR presents several advantages, mainly higher sensitivity. The present study aimed to analyze the occurrence of intermittency on leptospiral shedding by PCR in naturally and experimentally infected animals. In this study two experiments were conducted, the first with 60 cows naturally infected from an endemic herd. The second one was conducted in three sheep experimentally infected, each one with a different strain of Leptospira (strains Copenhageni L1-130, Canicola LO-4 and Pomona Fromm). Considering cattle, 43.3% presented negative in all tests, the remaining (56.7%) were positive at least once. From these, only one (1.6%) was positive in all samples, and seven (11.8%) were positive only in the last sampling, making it impossible to evaluate the intermittency. Noteworthy, 26 cows (43.3%) presented the typical intermittent pattern of leptospiral shedding in urine. In sheep, all experimentally infected animals presented the typical intermittent shedding patterns, independently of the inoculated leptospiral strain. We considered that a careful serial analysis of urine samples for a more definitive and reliable individual diagnosis would be required for a successful antimicrobial therapy and control of leptospirosis on a herd.

RESUMO: Durante muito tempo, foi afirmado que a eliminação de leptospiras na urina era intermitente, o que havia sido demonstrado principalmente por meio do cultivo microbiano. No entanto, a cultura apresenta graves limitações, principalmente com relação à baixa sensibilidade. Em contraste, a PCR apresenta várias vantagens em relação ao cultivo bacteriológico para leptospiras, sendo esta ferramenta cada vez mais utilizada para o diagnóstico de animais eliminadores da bactéria em diversos sítios. Assim, o presente estudo teve como objetivo analisar a ocorrência de intermitência na eliminação de leptospiras por meio de PCR em animais natural e experimentalmente infectados. Para este estudo foram realizados dois experimentos, sendo o primeiro com 60 vacas naturalmente infectadas de um rebanho sabidamente endêmico e o segundo em três ovelhas experimentalmente infectadas, cada uma com uma estirpe diferente de Leptospira (estirpes Copenhageni L1-130, Canicola LO-4 e Pomona Fromm). Considerando-se os bovinos, 43,3% apresentaram negatividade em todos os testes, sendo os demais 56,7% positivos ao menos uma vez. Destes, apenas um (1,6%) foi positivo em todas as amostras, e sete (11,8%) foram positivos somente na última coleta, o que impossibilitou a avaliação da intermitência. Não obstante, 26 vacas naturalmente infectadas (43,3%) apresentaram o padrão de eliminação tipicamente intermitente de leptospiras na urina. Das três ovelhas experimentalmente infectadas, todas apresentaram eliminação intermitente da bactéria na urina, independentemente da estirpe inoculada. Consideramos que seria necessária uma cuidadosa análise seriada de amostras de urina para um diagnóstico individual mais definitivo e confiável para uma terapia antimicrobiana bem-sucedida e o controle da leptospirose em um rebanho.

Leptospirosis in native mixed-breed sheep slaughtered in a semiarid region of Brazil / Leptospirose em ovinos mestiços abatidos em uma região semiárida do Brasil

ABSTRACT: Sheep breeding is an economic activity of great value for the Brazilian livestock industry, and infectious diseases can significantly compromise its productivity. The aim of this study was to detect Leptospira spp. in mixed breed sheep from a semiarid region of the State of Paraíba, Northeast Brazil. In total, 49 blood and renal tissue samples, as well as 25 urine samples, were collected from 49 sheep in the slaughter line. The microscopic agglutination test (MAT) was used to verify the presence of anti -Leptospira spp. antibodies in blood samples. Renal tissue and urine samples were analyzed by both PCR and bacterial culture. Sero reactivity was observed in 8.2% (4/49) of animals. Three renal samples were positive for leptospiral DNA by PCR although all urine samples were negative. No leptospires in pure culture were recovered from the samples tested. Low prevalence of Leptospira spp. observed by serology and PCR suggested that the rusticity of the mixed-breed sheep may have contributed to the low occurrence of leptospirosis in the semiarid region investigated.

RESUMO: A criação de ovinos é uma atividade econômica de grande valor para a indústria pecuária brasileira. As doenças infecciosas podem comprometer significativamente a sua produtividade. O objetivo deste estudo foi detectar Leptospira spp. em ovinos sem raça definida a partir de uma região semiárida do estado da Paraíba, Nordeste do Brasil. Quarenta e nove amostras de sangue e tecido renal, bem como amostras de urina, de 25 das 49 ovelhas, foram coletados na linha de abate. A presença de anticorpos anti -Leptospira spp. foi verificada com o teste de aglutinação microscópica (SAM). As amostras de urina e rins foram processadas por PCR e cultura bacteriológica. Sororreatividade foi observada em 8,2% (4/49) dos animais. Em relação à PCR, três amostras renais foram positivas, no entanto, todas as amostras de urina foram negativas. Nenhuma cultura pura de leptospiras foi recuperada a partir das amostras testadas. Levando em consideração a baixa frequência de positividade na sorologia e PCR, é possível sugerir que a rusticidade das ovelhas de raças mestiças colaborou para a baixa ocorrência de leptospirose na região semiárida investigada.

Comparative genomic analysis of Brazilian Leptospira kirschneri serogroup Pomona serovar Mozdok

Leptospira kirschneri is one of the pathogenic species of the Leptospira genus. Human and animal infection from L. kirschneri gained further attention over the last few decades. Here we present the isolation and characterisation of Brazilian L. kirschneri serogroup Pomona serovar Mozdok strain M36/05 and the comparative genomic analysis with Brazilian human strain 61H. The M36/05 strain caused pulmonary hemorrhagic lesions in the hamster model, showing high virulence. The studied genomes presented high symmetrical identity and the in silico multilocus sequence typing analysis resulted in a new allelic profile (ST101) that so far has only been associated with the Brazilian L. kirschneri serogroup Pomona serovar Mozdok strains. Considering the environmental conditions and high genomic similarity observed between strains, we suggest the existence of a Brazilian L. kirschneri serogroup Pomona serovar Mozdok lineage that could represent a high public health risk; further studies are necessary to confirm the lineage significance and distribution.

Análise de custo-efetividade de protocolos no diagnóstico da tuberculose bovina em um rebanho naturalmente infectado / Cost-effectiveness of protocols for diagnosis of bovine tuberculosis in a naturally infected herd

Em diversos países, a tuberculose bovina, causada por Mycobacterium bovis, é tanto um problema econômico quanto de saúde pública. Mundialmente, são implementados programas de erradicação da enfermidade com políticas baseadas em testes tuberculínicos e abate dos animais reativos, porém pouco se sabe sobre os custos e a efetividade das políticas de erradicação. O presente estudo avaliou a relação de custo-efetividade dos protocolos de diagnóstico da tuberculose bovina, em uma abordagem multidisciplinar, empregados em um rebanho naturalmente infectado. Após realização da análise de custo-efetividade (C/Ef) dos protocolos diagnósticos ante-mortem observou-se que o Teste Cervical Comparativo (C/Ef=4,68), quando utilizado isoladamente, é a escolha diagnóstica mais custo-efetiva para um rebanho naturalmente infectado. Para os protocolos confirmatórios de diagnóstico post-mortem a histopatologia (C/Ef=17,47) associada ao Teste Cervical Simples e Teste Cervical Comparativo foi a escolha mais custo-efetiva para os animais do rebanho estudado. Entretanto, o único protocolo eficaz em diagnosticar 100% dos animais infectados foi o uso em conjunto do teste humoral ELISA associado ao teste celular IFN.(AU)

In several countries, bovine tuberculosis, caused by Mycobacterium bovis, is an economic and public health problem. Worldwide disease eradication programs are implemented with policies based on tuberculin testing and slaughter of reactive animals. However, little is known about the costs and the effectiveness of the eradication policies. We evaluated the cost-effectiveness of bovine tuberculosis diagnostic protocols on a multidisciplinary approach, applied in a naturally infected herd. Regarding the cost-effectiveness analysis (C/Ef) of ante-mortem diagnostic protocols, the Cervical Comparative Test (C/Ep=4.68), when used alone, is the diagnostic protocol most cost-effective for a naturally infected herd. For post-mortem confirmatory diagnostic, the histopathology (C/Ep=17.47) associated with the Cervical Simple Test and Cervical Comparative Test was the most cost-effective choice for the animals studied in this herd. However, the only diagnostic protocol that was able to identify 100% of the infected animals was the ELISA associated with the IFN test.(AU)

Qualitative and quantitative analysis of bacteria from vaginitis associated with intravaginal implants in ewes following estrus synchronization / Análise qualitativa e quantitativa de bactérias da vaginite associadas com implante intravaginal em ovelhas após sincronização de estro

ABSTRACT: This study evaluated the presence of vaginitis and the bacterial load associated with different intravaginal implants in ewes. Twenty-four Dorper and crossbred ewes were allocated into three groups and received intravaginal implant containing 0.3g progesterone (CIDR(r)), 60mg MAP or sponges without progesterone (CONTROL) for six days. Then, CIDR and MAP treated-ewes received 12.5mg dinoprost and 300IU eCG. Vaginal mucus samples were collected at four times: before device insertion, at the day of its removal, 24 and 48 hours after. The samples were cultured and the colonies were counted (CFU/mL) and identified. The results obtained from the counting of CFU mL-1 were submitted to Kruskal-Wallis H test, with P<0.05 being considered significant. Before device insertion, 68.2% of the samples yielded Staphylococcus spp. and 60.0% of them were Staphylococcus aureus. After implant removal, 100% of ewes had clinical signs of vaginitis. However, the level of local infection in the CONTROL-ewes was lower (P>0.05) in comparison with MAP and CIDR-treated ewes. During the occurrence of vaginitis, the predominant isolates belonged to the coliform group, mainly Escherichia coli (72.7%). Such infection was not determined by the members of the vaginal microbiota that were present before implant insertion and normal microbiota was restored between 24 to 48 hours after insert removal.

RESUMO: Este estudo avaliou a presença de vaginite e contagem bacteriana associada ao uso de diferentes dipositivos intravaginais em ovelhas. Vinte e quatro fêmeas Dorper e mestiças foram alocadas em três grupos e receberam implante intravaginal contendo 0,3g de progesterona (CIDR(r)), 60mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP) ou esponjas sem progesterona (CONTROLE) por seis dias. Posteriormente, as ovelhas tratadas com CIDR e MAP receberam 12,5mg de dinoprost e 300 UI de eCG. Amostras do muco vaginal foram coletadas em quatro momentos: antes da inserção do dispositivo, no dia de sua retirada, 24 e 48 horas após. As amostras foram cultivadas e as colônias foram contadas (UFC mL-1) e identificadas. Os resultados obtidos da contagem das UFC mL-1 foram submetidos ao teste do qui-quadrado, com P<0,05 sendo considerado significativo. Antes da inserção do dispositivo, 68,2% das amostras continham Staphylococcus spp., sendo 60,0% delas Staphylococcus aureus. Após a remoção do implante, 100% das ovelhas apresentaram sinais clínicos de vaginite. Entretanto, o grau de infecção local nas ovelhas do grupo CONTROLE foi menor (P>0.05), em comparação com as ovelhas recebendo CIDR e MAP. Durante a ocorrência da vaginite, os isolados predominantes pertenciam ao grupo dos coliformes, principalmente Escherichia coli (72,7%). Tal infecção não foi determinada pelos membros da microbiota vaginal, que estavam presentes antes da inserção dos dispositivos, e a microbiota normal foi reestabelecida entre 24 e 48 horas após sua remoção.

First isolation and characterization of Leptospira interrogans serogroup Australis from swine in Brazil / Primeiro isolamento e caracterização da Leptospira interrogans sorogrupo Australis de suíno no Brasil

The purpose of this study was to report the first recovery and characterization of Leptospira interrogans (serogroup Australis) from urine of swine in Brazil. The isolate was studied by serogrouping, MLVA, PGFE, and partial sequencing of rrs and secY. It was serogrouped as serogroup Australis, probably serovar Bratislava (titre 1,600), and sequenced as Leptospira interrogans. The MLVA and PGFE profiles also suggested the isolate as serovar Bratislava, since they were indistinguishable from reference strains Balico and Jez Bratislava. This is the first Leptospira interrogans serogroup Australis isolate, probably serovar Bratislava, obtained in Brazil...

O objetivo deste estudo foi relatar o primeiro isolamento e caracterização de Leptospira interrogans (sorogrupo Australis) a partir da urina de suínos no Brasil. O isolado foi caracterizado por sorogrupagem, MLVA, PGFE, e sequenciamento parcial de rrs e secY. Este foi identificado como pertencente ao sorogurpo Australis, provavelmente sorovar Bratislava (título 1600) e sequenciado como Leptospira interrogans. Os perfis de MLVA e PGFE também sugeriram o isolado como sorovar Bratislava, uma vez que estes foram indistinguíveis das cepas de referência Balico e Jez Bratislva. Este é o primeiro isolado de Leptospira interrogans sorogrupo Australis, provavelmente sorovar Bratislava, obtido no Brasil...

Molecular characterization of the first leptospires isolated from goats in Brazil

Two Leptospira sp. isolates were obtained by the first time from goats in Brazil and characterized by sequencing rrs, rpoB and secY genes, PFGE and typing with monoclonal antibodies. Both isolates are identical and belong to Leptospira santarosai. Analysis of the rrs and the rpoB genes sequences revealed 100% identity between the goat isolates and the Bananal reference strain. When secY sequences of the two isolates were compared to each other, it was observed that they had identical sequences. However, when compared to that of the Bananal reference strain, there were 15 mismatches along the 549 bp secY sequence. In conclusion, molecular methods are increasingly useful for the characterization of leptospires and allowed to identify those isolates of caprine origin as closely related but not identical to serovar Bananal, and constitute a new type named Carioca.

Evaluation of a MPB70-ELISA to differentiate Mycobacterium bovis from M. avium-sensitized swine / Avaliação de um MPB70-ELISA para diferenciar entre suínos sensibilizados com Mycobacterium bovis ou M. avium

Swine are susceptible to different mycobacteria species, being Mycobacterium bovis an agent of tuberculosis, with most significant zoonotic risks, while M. avium determines a granulomatous lymphadenitis with low zoonotic risk. Currently performed intradermal tests present some important limitations, such as the lack of ability to detect anergic animals or to differentiate among mycobacterial species. In order to improve the TB diagnosis, serological assays have been developed, with encouraging results. The purpose of this study was to evaluate the performance of a MPB70-ELISA in 82 piglets divided into four groups: sensitized by inactivated M. bovis, M. avium, inoculated with oil adjuvant, or with saline solution. The test was able to discriminate between an animal sensitized by M. bovis and animals of the three other groups, including M. avium-sensitized animals; for this reason, we suggest that MPB70-ELISA could be used as a complementary tool for discriminating the agent of the mycobacteriosis, and therefore to diagnose tuberculosis in a swine herd.(AU)

Suínos são suscetíveis a diferentes espécies de micobactérias, sendo Mycobacterium bovis agente de tuberculose (TB), com claro risco zoonótico, enquanto M. avium determina uma linfadenite granulomatosa (LG) de baixo risco zoonótico. Os testes intradérmicos atualmente realizados apresentam algumas limitações importantes, como a falta de habilidade em detectar animais anérgicos ou de diferenciar entre as espécies micobacterianas. Com o intuito de melhorar o diagnóstico de TB, testes sorológicos têm sido desenvolvidos, com resultados encorajadores. O objetivo do presente estudo foi avaliar um MPB70-ELISA em 82 leitões divididos em quatro grupos: sensibilizados por M. bovis, por M. avium, inoculados com óleo adjuvante ou com solução salina. O teste foi capaz de discriminar entre os animais sensibilizados com M. bovis dos demais três grupos, incluindo aqueles que foram sensibilizados com M. avium; desta forma, sugere-se que o MPB70-ELISA poderia ser utilizado como ferramenta complementar para discriminar o agente da micobacteriose, e portanto diagnosticar TB em um plantel de suínos.(AU)

Detection of specific antibodies in cows after injection of PPD / Detecção de anticorpos específicos em vacas após a injeção de PPD

The diagnosis of bovine tuberculosis aims to identify the immune response against mycobacterial antigens. Although Single Intradermal Comparative Cervical Tuberculin test (SICCT) is broadly used for first identification of the disease, the performance of ELISAs has been investigated for diagnosis improvement. The present study expected to find out the influence of intradermal skin tests on the results of ELISAs using the recombinant proteins MPB70 and MPB83 as antigens on cows from a naturally infected herd. Results were analyzed by the F-test, Mann-Whitney and Friedman tests Although comparable to both proteins, results showed that positive animals presented a tendency of augment reactivity to MPB70, representing a tendency for a booster effect, but not to MPB83.

O diagnóstico da tuberculose bovina baseia-se na identificação da resposta imune do animal frente aos antígenos de Mycobacterium bovis. Embora o teste intradérmico comparativo cervical seja o mais empregado como primeiro teste diagnóstico, outras técnicas, como ELISA, tem sido investigadas para aumentar a detecção de animais infectados. O presente estudo analisou se os testes intradérmicos influenciariam os resultados de ELISAs que utilizaram as proteínas MPB70 e MPB83 como antígenos de captura em um rebanho naturalmente infectado. Os resultados foram analisados por meio de testes estatísticos de comparação e correlação de resultados: teste-F, Mann-Whitney e Friedman. O desempenho de ambos os ELISAs foi comparável; no entanto, os resultados demonstraram que entre os animais positivos, houve um aumento de reatividade ao MPB70, dado este que não foi observado junto ao ELISA-MPB83.

Padronização do teste imunoalérgico aplicado ao diagnóstico da tuberculose e micobacterioses em suínos (Sus scrofa) experimentalmente sensibilizados com suspensões oleosas de Mycobacterium bovis ou M. avium inativados / Standardization of the immunoallergic skin test applied for the diagnosis of tuberculosis and mycobacterioses in swine (Sus scrofa) experimentally sensitized with oil suspensions of inactivated Mycobacterium bovis or M. avium

Foi investigado o valor diagnóstico da resposta alérgica cutânea em leitões experimentalmente sensibilizados, pela via intramuscular, com suspensões oleosas de Mycobacterium bovis ou M. avium inativados pelo calor.Foram utilizados 91 animais, divididos em quatro grupos: grupos A e B, cada um com 25 indivíduos, grupos C e D com 21 e 20 indivíduos respectivamente, balanceando-se as características de raça, linhagem, faixa etária e sexo. Aos 30 dias de idade, todos os animais foram submetidos a uma triagem com a aplicação de tuberculina PPD bovina, pela via intradérmica na base da orelha e não houve qualquer tipo de reação. Decorridos 60 dias do teste tuberculínico de triagem, o grupo A recebeu injeção intramuscular de 0,5 mL de uma suspensão oleosa de M. avium estirpe D4; o grupo B recebeu 0,5 mL de uma suspensão oleosa de M. bovis estirpe AN5; o grupo C (controle I), recebeu 0,5 mL do adjuvante oleoso; e o grupo D (controle II), recebeu 0,5 mL de solução fisiológica. Após 30 dias da sensibilização foi realizada a prova de tuberculinização comparativa com reação medida pela variação da espessura da pele com cutímetro de mola às 0h, 24h, 48h e 72h, após a aplicação das tuberculinas. No teste comparativo, lido às 48 ou 72 horas, a reação foi considerada negativa quando a diferença das reações entre o PPD bovino e o PPD aviário foi menor que 6,7 mm; suspeito ou inconclusivo quando a diferença se situou na faixa de 6,7 a 7,5 mm; e positiva de acordo com o tipo de PPD, considerando-se tuberculose para PPD M. bovis e micobacteriose para PPD M. avium, quando a diferença da reação foi superior a 7,5 mm.

The diagnostic value of the cutaneous allergic response to tuberculin in piglets experimentally sensitized intramuscularly with the oily suspensions of heat inactivated M. bovis or M. avium was investigated. Ninety-one animals were used and divided into four groups: groups A and B were formed each with 25 individuals, and groups C and D, with 21 and 20 individuals, respectively, balancing the characteristics of race, ancestry, age and sex. At the age of 30 days, all the animals were submitted to the screening test with the use of M. bovis PPD, by the intradermal route at the base of the ear and no reaction was detected. Sixty days after the screening tuberculin test, animals of the group A were injected intramuscularly with 0.5 mL of oily suspension of M. avium D4 strain; animals of the group B received 0.5 mL of an oily suspension of M. bovis, AN5 strain; group C (control I) received 0.5 mL of an oily adjuvant; and the individuals of the group D (control II) received 0.5 mL of saline solution. Following 30 days of sensitization, comparative skin reactions were measured by the variation in skin thickness with a caliper at 0h, 24h, 48h an 72h after applications of tuberculins. In the comparative test measured at 48 or 72h, the reaction was considered negative when the difference of the reactions between bovine PPD and avian PPD was less than 6.7 mm; suspected or inconclusive, when the difference stood in the range of 6.7 to 7.5 mm; and positive according to the type of PPD, considering tuberculosis the M. bovis PPD and mycobacteriosis the M. avium PPD, when the difference of the reaction was greater than 7.5 mm.

Molecular detection of leptospiral carriers in sheep under tropical field conditions / Detecção molecular de ovinos carreadores de Leptospira em ambiente tropical

The purpose of this study was to analyze the usefulness of PCR for the detection of leptospiral carriers in sheep under tropical field conditions. Two flocks, previously reported as seroreactive (A) and seronegative (B), were selected for this study. From those, the totality of animals of each flock, urine and vaginal fluid (VF)/semen were collected for bacteriological culture and PCR, as well as serum samples for serology. Serology confirmed the previous status of the two flocks. Culture was negative for all the samples. In PCR, animals of Flock A presented 26.7% (VF), 33.3% (semen) and 38.9% (urine) of positivity. Flock B presented 40.0% (VF), 33.3% (semen) and 5.6% (urine) of positivity by PCR. In conclusion, PCR was important to identify carriers of leptospires, including animals from a seronegative flock, what reinforces the advantages of the usage of this tool for the detection of carriers in sheep as part of control programs of leptospirosis under tropical field conditions.

O objetivo do presente estudo foi analisar a aplicabilidade da PCR na detecção de ovinos carreadores de Leptospira em ambiente tropical. Dois rebanhos ovinos, previamente reportados como sororeativo (A) e soronegativo (B) foram selecionados para este estudo. Da totalidade de animais dos rebanhos, amostras de urina e fluido vaginal (FV)/sêmen foram colhidas para cultura bacteriológica e PCR. Além disso, amostras de soro foram colhidas e utilizadas na sorologia (teste da soroaglutinação microscópica). Essa técnica confirmou o estado prévio dos dois rebanhos. Nenhuma amostra pura de leptospiras foi obtida no cultivo. Já na PCR, animais do Rebanho A apresentaram 26,7% (FV), 33,3% (sêmen) e 38,9% (urina) de amostras positivas. O Rebanho B apresentou 40,0% (FV), 33,3% (sêmen) e 5,6% (urina) de positividade pela PCR. Em conclusão, a PCR foi uma importante ferramenta na identificação de carreadores de leptospiras, incluindo animais do rebanho soronegativo, o que reforça as vantagens do uso desta técnica para a detecção de ovinos portadores como parte dos programas de controle da leptospirose em ambiente tropical.

Comparison of cefoxitin disk diffusion test and mecA gene PCR results for methicillin resistance detection in Staphylococcus intermedius group isolates from canine origin in Brazil

The study evaluated cefoxitin disk diffusion tests breakpoints and their correlation to mecA gene PCR results for detecting Methicillin-resistant Staphylococcus intermedius Group (MRSP) isolates from dogs in Brazil. Agreement using proposed breakpoint (resistant < 30 mm) was encouraging. The current study reinforces that an epidemiological breakpoint can be established to predict presence of MRSP.

A multidisciplinary approach to diagnose naturally occurring bovine tuberculosis in Brazil / Uma abordagem multidisciplinar para o diagnóstico de tuberculose bovina em um rebanho naturalmente infectado no Brasil

A herd infected naturally with tuberculosis was investigated by different diagnostic methods. Ninety days after a screening test that identified 21 cows as skin test positive, a Comparative Intradermal Tuberculin Test (CITT) was performed in those 21 cows and in 29 other randomly selected skin test negative cows. Milk samples and nasal swabs were collected prior to the CITT for bacteriological culture and PCR, while blood samples were collected for IFN release and antibody responses to MPB70 and MPB83, at three time points post tuberculin injection. Animals positive by CITT were slaughtered and disease confirmation undertaken. Based on the Kappa test, IFN was comparable to the standard tests (culture, PCR and CITT) at all three sampling points. Results from both antibody ELISAs were similar but were not comparable to the standard tests. T-test analysis of the CITT, IFN and ELISAs demonstrated that their performances were not correlated. There is increasing recognition that individually, available diagnostic tests do not detect all infected cattle. Therefore, a comprehensive strategy for the diagnosis of bovine TB should include test results for the detection of both cellular and humoral immune responses where there may be animals at different stages of infection.

Um rebanho bovino naturalmente infectado por tuberculose foi analisado através de diferentes métodos diagnósticos. Um teste intradérmico simples (TIC) identificou 21 animais como positivos. Após 90 dias deste resultado, um teste intradérmico comparativo (TIC) foi aplicado nos 21 animais positivos ao TIS, além de outros 29 animais com resultados prévios negativos escolhidos aleatoriamente. De todos estes animais (50), foram coletadas amostras de leite e secreção nasal para isolamento e identificação de microrganismos por cultura e PCR; amostras de sangue de cada um dos animais foram coletadas para exames de ELISA: produção de Interferon-gama (IFN) e pesquisa de anticorpos frente aos antígenos MPB70 e MPB83. Tais amostras sanguíneas foram coletadas em três diferentes momentos: no dia da execução do TIC e nos dias dia 7 e dia 21 após a execução do TIC. Os animais que foram positivos a este teste foram abatidos; exames de identificação do agente, tais como cultivo e PCR foram realizados post-mortem para confirmação da doença. Baseado na análise Kappa, IFN apresentou resultados estatisticamente comparáveis aos resultados de isolamento e identificação bacteriana por cultura e PCR, além do TIC ao longo de todo o experimento. No entanto, TIC, ELISA e IFN não foram estatisticamente comparáveis. Tais resultados sugeriram que nenhum dos atuais métodos de diagnóstico para tuberculose possibilitou a identificação de todos os animais infectados. Por este motivo, uma estratégia mais abrangente deveria incluir métodos de diagnóstico que pudessem identificar a resposta imune celular e humoral, uma vez que animais de um mesmo rebanho poderiam se encontrar em diferentes estágios da infecção.

Fatal diarrhea caused by multidrug resistant Pseudomonas aeruginosa in a foal from Rio de Janeiro, Brazil

The present study evaluated the susceptibility pattern of one Pseudomonas aeruginosa isolate obtained from a deceased foal following an acute case of diarrhea. The isolate was identified by reference methods and tested with a panel of 27 antimicrobial agents. Pseudomonas aeruginosa was confirmed in pure culture and the isolate demonstrated resistance to all tested antimicrobials. Since it was a unique case in this herd, we suggest that contamination did not happen by horizontal transmission. The multidrug resistance was unexpected, associated to the virulence of the isolate, that killed the foal in five days, despite treatment.